Caracterização molecular e preservação de isolados de bactérias diazotróficas associadas ao arroz

Abstract

As bactérias diazotróficas, simbióticas ou de vida livre, exercem papel importante na fixação biológica de nitrogênio e suprimento deste nutriente primário aos vegetais, dentre eles o arroz. O processo de conservação destes microrganismos é fundamental para suprir as demandas da pesquisa agrícola e deve garantir a manutenção das características originais dos isolados, livre de mutações. Os isolados bacterianos preservados em laboratório devem manter suas características originais, e livres de mutações. Este trabalho teve como objetivo avaliar métodos para preservação, e realizar caracterização molecular pela presença dos genes nifs D e H, em isolados bacterianos importantes na fixação biológica de nitrogênio para a cultura do arroz. Foi realizada a comparação entre os métodos de preservação dos microrganismos a fim de detectar qual deles asseguram a viabilidade, morfologia, fisiologia e genética dos isolados, mantendo a cultura viável por longo tempo em isolados provenientes da da Coleção de Microrganismos Fitopatogênicos “Profº. Gilson Soares da Silva – MGSS” do Laboratório de Fitopatologia, da Universidade Estadual do Maranhão. Quanto a caracterização da variabilidade genética, foram testados os métodos de agrupamento entre os isolados, visando a formação de grupos com a maior distância genética identificada. Para a confirmação da presença do gene nif no genoma dos isolados, foram utilizados primers específicos, e as sequências obtidas foram validadas e comparadas com o banco de dados de nucleotídeos National Center for Biotechnology Information (NCBI). A criopreservação confere a melhor preservação dos isolados e ainda, quanto a conservação dos isolados, estes se mantiveram com sobrevida, estavéis e puros diante dos métodos de preservação, mantendo suas configurações e especificidades genéticas e fenotípicas. Os isolados apresentaram altas taxas de similariedade para os genes nifD e nifH do gênero das Pseudomonas. Esse tipo de estudo é importante para contribuir com as pesquisas referentes à análise de DNA e mapeamento genético, e para enfatizar a importância da manutenção de coleções vivas para estudos filogenéticos