Pesquisa de parasitas do gênero Trypanosoma em peixes provenientes de municípios de São Bento e Bacurituba da Baixada Maranhense

Abstract

Os tripanossomas já foram reportados em diversas espécies de peixes de água salgada e doce, sendo a maioria das espécies descritas com base nas características morfológicas. Tripanossomas parasitas de peixes são heteroxenos e são transmitidos por hirudíneos. O presente trabalho teve por objetivo conhecer a diversidade de Trypanosoma em peixes capturados, provenientes de municípios de São Bento e Bacurituba na Baixada Maranhense, por meio de parâmetros moleculares. Foram realizadas duas coletas totalizando 103 amostras envolvendo quatro espécies, Hoplias malabaricus (traíra), Hoplerythrinus unitaeniatus (jeju), Pygocentrus nattereri (piranha vermelha) e Tilapia sp (tilápia). O sangue foi coletado por punção cardíaca para a confecção de esfregaços sanguíneos, que foram fixados com metanol e corados por Giemsa para a pesquisa de tripanossomas. A frequência geral de tripanossomas foi de 51/103 (49, 51%). Com o intuito de identificar as espécies de tripanossomas por método molecular, os esfregaços sanguíneos positivos foram utilizados para extração de DNA. Este foi utilizado para amplificação por PCR de dois segmentos gênicos considerados barcode deste grupo de parasitas, um fragmento de 800-900pb correspondente a região variável V7 e V8 do gene que codifica a subunidade menor do RNA ribossômico, e um fragmento de 600-700pb correspondente ao gene que codifica a enzima gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase glicossômica (gGAPDH). Das 51 amostras positivas em esfregaço sanguíneo, 37 foram positivas para ambos ou um dos segmentos gênicos, os quais foram submetidos a clonagem em plasmídeo pGEM-T. Desta forma foram obtidos clones de 17 amostras, sendo 6 para a região V7V8 e 11 para gGAPDH. Nos seqüenciamentos foram encontradas 7 sequências de tripanossomas das espécies Hoplias malabaricus (Traíra), Hoplerythrinus unitaeniatus (Jeju) e Pygocentrus nattereri (Piranha Vermelha). Deste modo, foi demonstrado que os peixes apresentaram sequências de uma espécie única e foram identificados como uma espécie próxima a Trypanosoma clandestinus por análises através do BLAST. Este é o primeiro estudo com Trypanosoma em peixes do Nordeste do Brasil e os resultados do presente estudo reforçam a necessidade de caracterização molecular usando abordagens sensíveis para avaliar o repertório de espécies de tripanosoma que infectam esses hospedeiros.