Produção embrionária in vitro a partir de oócitos bovinos selecionados por corantes vitais e maturados em meio suplementado

Abstract

As condições de cultivo in vitro e a competência oocitária são os principais fatores relacionados aos baixos resultados da produção in vitro de embriões. Desta forma este trabalho teve por objetivo avaliar a taxa de produção embrionária in vitro, a partir de oócitos bovinos selecionados por coloração com Azul Cresil Brilhante (ACB) ou Azul de Tripan (AT), maturados em meio suplementado com Insulina e/ou IGF I. Os ovários foram obtidos de abatedouro e os oócitos recuperados por aspiração folicular com auxílio de seringa e agulha. Selecionou-se, sob estereomicroscópio, os oócitos graus I e II para coloração, por ACB a 26 µM (SIGMA® ) por 60 minutos ou AT a 0,16% (VETEC® ) por 10 minutos, a 38,5°C, 5% CO2, 90% de umidade. Após a coloração os oócitos foram lavados 3 vezes em DMPBS (NUTRICELL® ) para classificação e separação em corados (ACB+ ou AT+) e não corados (ACB- ou AT-). Apenas os oócitos ACB+, AT+ e AT- foram submetidos às etapas subsequentes de maturação in vitro em meios sem suplementação (controle), suplementado com IGF I (10 ng/ mL), suplementado com insulina 12 UI/ mL ou suplementado com IGF I (10 ng/ mL) e Insulina (12 UI/ mL), fecundação in vitro e cultivo in vitro. No D8 do cultivo os oócitos foram avaliados quanto, produção e qualidade dos blastocistos, de acordo com a coloração e o meio de maturação. Quanto aos oócitos ACB+, observou-se que não houve diferença estatística em relação às taxas de clivagem, produção e qualidade dos blastocistos com a suplementação do meio de maturação. Tanto os oócitos AT+, quanto os AT- apresentaram bom desenvolvimento embrionário, em torno de 71% (AT+) e 89% (AT-) o que indica que o AT não é uma ferramenta muito eficiente de auxílio à seleção. Quanto ao meio de maturação utilizado pelos oócitos submetidos ao AT, notou-se que a suplementação com insulina proporcionou melhores resultados quanto à taxa de produção de blastocistos e a qualidade destes. Concluindo, desta forma, que o ACB é um corante eficaz no auxílio à seleção de oócitos mais competentes, e que a suplementação do meio de maturação com insulina ou IGF I melhora as taxas de produção e qualidade dos blastocistos, porém em oócitos já selecionados quanto à capacidade de desenvolvimento oocitário, esse aumento não é significativo.