Identificação de genes toxigênicos em estirpes de Sthaphylococcus aureus isoladas de leite cru refrigerado, leite pasteurizado e queijos provenientes de laticínios do Estado do Maranhão, Brasil

Abstract

O Staphylococcus aureus é um dos microrganismos patogênicos de grande influência na qualidade do leite e seus derivados, sendo uma das espécies bacterianas mais envolvidas nos casos de intoxicação alimentar e infecções devido à produção de várias toxinas responsáveis por doenças em animais e humanos. O objetivo deste trabalho foi investigar a presença dos genes toxigênicos, sea, seb, sec, sed, see por multiplex PCR e tst por uniplex PCR, em estirpes de S. aureus com caracterização fenotípica e genotípica isoladas de amostras de leite cru refrigerado, leite pasteurizado e queijos (coalho e mussarela) provenientes de quatro laticínios do Estado do Maranhão. Foram colhidas 120 amostras, sendo 10 de leite cru refrigerado, 10 de leite pasteurizado e 10 de queijo de cada um dos laticínios, obtidos de cinco lotes diferentes. A contaminação por Staphylococcus coagulase positivo estava presente em todas as amostras de leite cru refrigerado, apresentando elevadas contagens de até >106 UFC/mL. Independente do tipo de inspeção, 100% das amostras de queijo (coalho e mussarela) estavam fora dos padrões vigentes. Foram isoladas 60 cepas de S. aureus com identificação fenotípica, das quais 46 amplificaram o gene femA, específico desta espécie. Destas 46 cepas, 31 isoladas das amostras de leite cru refrigerado e três do queijo mussarela amplificaram algum gene de toxina. Observou-se 13 grupos genotípicos distintos para a presença dos genes toxigênicos, onde o genótipo mais frequente foi tst, presente em 10 (29,4%) cepas de S. aureus, seguido por sed e seb+sec+sed, cada um em quatro (11,8%), sec em três (8,8%), seb, see, seb+sec e sea+seb+sec+tst, cada um em duas (5,8%), seb+sed, sea+seb+sec, sea+sec+tst, seb+sec+tst e sea+seb+sec+sed+see, cada um presente em uma (3%) cepa. A presença de apenas um gene foi observada em 21 (61,8%) cepas de S. aureus, três (8,8%) amplificaram para dois genes, sete (20,6%) amplificaram três, dois (5,8%) amplificaram para quatro e uma (3%) para cinco genes. O gene sec foi o mais frequente em 15 (44,1%) cepas, seguido por seb e tst cada um presente em 14 (41,1%), sed em 10 (29,4%), sea em cinco (14,7%), e por último see que estava presente em três (8,8%) cepas de S. aureus. A análise molecular para identificação da espécie S. aureus apresentou melhor especificidade em relação aos testes fenotípicos. Os isolados demonstraram potencial genético para a produção de uma ou mais toxinas com a presença simultânea de dois a cinco genes, e a multiplex PCR se mostrou eficaz e exeqüível para investigação de cinco diferentes genes de toxinas