Perfil de expressão dos genes PRM-1, TNP-2, 17β-HSD3, LHR, MHC-I, MIC-B, NC1 e NC3 na espermatogênese bovina

Abstract

A espermatogênese consiste em um processo de modificações morfológicas, fisiológicas e bioquímicas complexas que ocorrem nos testículos, baseado em uma série de divisões (mitóticas e meióticas), que resultam na formação de espermatozoides nos túbulos seminíferos. Qualquer alteração ao longo desse processo pode determinar distúrbios reprodutivos variados que determinam subfertilidade até a infertilidade. O objetivo desta pesquisa foi analisar a expressão dos genes Protamina tipo 1 (PRM-1), Proteína de Transição Nuclear do tipo 2 (TNP-2), enzima 17β-Hidroxiesteróide Desidrogenase tipo 3 (17β-HSD3), Receptor do Hormônio Luteinizante (LHR), Complexo de Histocompatibilidade Principal de classe I (MHC-I), MIC-B, NC1 e NC3 na espermatogênese de bovinos, correlacionando os resultados ao nível de maturação histológica do epitélio seminífero. Foram utilizados testículos de 36 bovinos, sem padrão racial e independente da idade. À luz do nosso conhecimento, este é o primeiro estudo em bovinos que utiliza os critérios de Johnsen para correlacionar os escores médios à expressão diferencial dos genes envolvidos no processo de espermatogênese. O RNA extraído do parênquima testicular foi submetido ao RT-PCR em tempo real, sendo os genes (PRM-1, TNP-2, 17β-HSD3, LHR, MHC-I, MIC-B, NC1, NC3) avaliados com base na análise histológica. Constatou-se que os indivíduos avaliados pertenciam aos escores médios: seis, sete e oito, e que não houve diferença estatística significativa (p>0,05) nos escores da espermatogênese entre os testículos direito e esquerdo de cada animal. Os resultados obtidos da análise do qRT-PCR demonstraram que todos os genes avaliados foram expressos no testículo bovino nos diferentes escores estudados, embora a magnitude de expressão de cada gene tenha sido extremamente variável dentro do mesmo escore e somente para alguns genes quando comparados entre os escores. Houve diferença estatística significativa (p0,05) quando comparado entre eles. Não houve diferença estatística significativa (p>0,05) na expressão dos genes MHC-I genérico e o MHC-Ib (MIC-B, NC1 e NC3) quando comparada as médias dos três escores avaliados, podendo-se sugerir que estas moléculas tem ação indireta na espermatogênese bovina. Houve correlação positiva significativa (p<0,05) entre os níveis de transcrição dos genes 17β-HSD3 e LHR, assim como entre PRM-1 e TNP-2, no escore oito. A partir dos resultados obtidos foi possível observar que a avaliação histopatológica do testículo bovino aliada a técnicas moleculares são importantes na qualificação da espermatogênese, podendo auxiliar no prognóstico de animais com produção espermática normal a anormal; os genes MHC-I genérico, MHC-Ib e LHR foram pouco expressos, sugerindo que estas moléculas atuam indiretamente na espermatogênese; os níveis de transcrição dos genes PRM1, TNP-2 e 17β-HSD3 foram relativamente altos, demonstrando que os animais apresentavam boa espermatogênese; os genes PRM-1, TNP-2, 17β-HSD3 e LHR atuam diretamente no desenvolvimento diferencial das células germinativas durante a espermatogênese e que alterações durante o processo transcricional podem interferir na capacidade reprodutiva dos machos.