Biologia do desenvolvimento da tartaruga semi-aquática Kinosternon scorpioides (Testudines, Kinosternidae): validação do gene de referência Protein Phosphatase 1 (PP1)

Abstract

Dados documentais científicos disponibilizados nas bases de dados tanto brasileira quanto mundial sobre as tartarugas representam valiosas contribuições a novos estudos sobre os répteis. Entretanto, as pesquisas sobre quelônios ainda necessitam de novas informações de sustentação científica em aspectos referentes à própria biologia que levem a tomadas de ações voltadas para a conservação das espécies. Diante disso, o capítulo I tem como objetivo fazer o delineamento do estado da arte para a espécie K. scorpioides, de forma a contribuir com informações científicas não somente para esta espécie, mas aos quelônios de forma em geral. O capítulo II visa descrever a morfologia do desenvolvimento do K. scorpioides em diferentes fases, tendo como base a descrição fenotípica e o capítulo III, validar a utilização de primers heterólogos descritos para Trachemys scripta, bem como a expressão do gene PP1 em K. scorpioides identificando assim um gene de referência para estudos no gênero Kinosternon. Tendo como base a descrição fenotípica, utilizou-se 169 ovos incubados em chocadeiras ajustadas a 26° e 30°C onde foram retirados três exemplares em intervalos regulares de 1 semana até a 25ª semana. Já na parte molecular, utilizou-se 27 amostras de cDNA e DNA total de embriões/fetos de K. scorpioides em diferentes estágios embrionários para validação do gene de interesse. Diante dos resultados, a eclosão do ovo se deu em 25 semanas e descrevemos fenotipicamente 54 amostras, a partir dos quais reconhecemos 25 estágios e descrevemos 8 destes. Os elementos morfológicos encontrados se assemelham aos das demais espécies de tartarugas mostrando-se os embriões de fêmeas mais pesados que os de macho ao longo do desenvolvimento. Já a amplificação por PCR convencional da PP1 mostrou resultados positivos em todos os indivíduos amostrados, tanto nas reações realizadas a partir dos cDNAs obtidos, quanto nas amostras de DNA total dos indivíduos adultos e a uniformidade da expressão do gene em diferentes fases foi comprovada a partir da análise da concentração de DNA amplificado. Dessa forma, tanto a amplificação cruzada do primer utilizado, quanto a efetividade de PP1 como um gene de referência foram validados em K. scorpioides, fornecendo uma ferramenta importante para os estudos de desenvolvimento embrionário e mecanismos genéticos envolvidos na Determinação Sexual Dependente da Temperatura/TSD.